HDV RNA檢測的研究現(xiàn)狀

HDV是一種血源性傳播病原體，也是目前已知能夠感染人類的最小病毒[1]。HDV最初于1977年被Rizzetto等[2]首先在HBV感染相關重癥肝炎患者中發(fā)現(xiàn)。HDV是一種衛(wèi)星病毒，其感染和傳播均需要依賴HBV。因HDV感染而引起的丁型肝炎是最嚴重類型的病毒性肝炎。近年隨著HDV檢測準確性的不斷提高，人們意識到HDV的流行率被嚴重低估，既往認為丁型肝炎發(fā)病率低的看法被徹底顛覆，HDV的精準檢測也逐漸成為研究熱點。

1 HDV的流行率及其危害

根據(jù)2020年的一項研究[1]估計，全球約有1200萬人感染HDV。然而由于存在地區(qū)差異、人群差異、診斷方式差異，HDV的感染率被嚴重低估，后續(xù)有研究不斷更新了HDV的感染率，2021—2023年發(fā)表的薈萃分析[3-4]報道了HDV的感染人數(shù)高達5000萬~7200萬。

目前已知感染HDV的高危因素包括靜脈吸毒(IVDU)、高危性行為(HRSB)、HIV感染、HCV感染、高發(fā)地區(qū)人口遷徙等。因此HDV的流行率存在較大的地域及人群差異。Miao等[4]通過對1980—2019年發(fā)表的研究進行薈萃分析發(fā)現(xiàn)，HDV在普通人群中的流行率約為0.80%，在HBsAg陽性人群可高達13.02%，在靜脈吸毒人群中的流行率為37.57%，在高危性行為人群中為17.01%。2022年Chen等[3]對1990—2021年發(fā)表的研究進行薈萃分析，發(fā)現(xiàn)在全球范圍內(nèi)，HDV/HBV/HIV三重感染者占HIV感染者的7.4%，在亞洲地區(qū)HDV有更高的流行率，尤其是在中國臺灣地區(qū)，HDV/HBV/HIV三重感染率甚至高達21.4%。

HDV的流行率遠超預期，HDV篩查尤其是對特殊人群的HDV檢測更加應該引起重視。2017年歐洲肝病學會[5]和2016年亞太肝病學會[6]均建議對所有HBsAg陽性人群進行至少一次HDV檢測。2018年美國肝病學會[7]則建議HDV的篩查不僅應在HBsAg陽性人群中進行，更應該在HDV高危人群中規(guī)律進行。目前大多數(shù)國家及地區(qū)采用HDV血清學檢測(即HDV抗體)為主要檢測方式。2015年世界衛(wèi)生組織(WHO)慢性乙型肝炎指南[8]建議HDV活動期應根據(jù)HDV抗體滴度診斷，再通過HDV RNA檢測進行最終確診。然而根據(jù)WHO統(tǒng)計，目前全球只有64.9%的HDV抗體陽性患者接受HDV RNA檢測，而非洲地區(qū)檢測率更是遠低于其他地區(qū)，僅有41.3%的HDV抗體陽性患者進行了RNA檢測[1]。造成HDV檢測率低及各地區(qū)檢測率不同的原因，除了不同國家醫(yī)療水平存在差異，患者及醫(yī)療工作者對HDV的認識不同以外，更要歸因于HDV檢測方式及檢測精準度存在巨大差異。

2 HDV特征及其對RNA檢測的影響

HDV顆粒直徑為36 nm，基因組長度約1.7 kb，可編碼兩種形式的丁型肝炎抗原(HDAg)，即小HDAg(S-HDAg)和大HDAg(L-HDAg)。S-HDAg是啟動和維持HDV RNA復制所必需；L-HDAg可抑制HDV復制，對于病毒顆粒的組裝至關重要[9]。HDV僅在肝細胞核中復制，其病毒顆粒存在缺陷，故HDV的復制依賴于HBV。作為一種包膜蛋白，HBsAg允許HDV進入肝細胞。HDV和HBV首先與肝細胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖結合，通過?；悄懰徕c協(xié)同轉(zhuǎn)運多肽(NTCP)進入宿主細胞[10]。在發(fā)生細胞膜融合后，核糖核蛋白(RNP)復合物被釋放并進一步被轉(zhuǎn)運到細胞核，在細胞核內(nèi)S-HDAg的mRNA被轉(zhuǎn)錄和翻譯。進入細胞核的RNA基因組(HDV-G)作為第一次滾動環(huán)擴增的模板參與復制，所產(chǎn)生的反式基因組RNA(HDV-AG)聚合物被核酶切割并連接成環(huán)狀單體。使用HDV-AG作為模板，合成HDV基因組RNA聚合物，并進一步裂解形成單體。細胞腺苷脫氨酶1通過調(diào)節(jié)HDV-AG來調(diào)控L-HDAg的轉(zhuǎn)錄和翻譯[9]。S-HDAg和L-HDAg被轉(zhuǎn)運到細胞核，進一步調(diào)節(jié)病毒復制或與HDV RNA結合形成RNP。含有HDV基因組RNA的RNP可以通過L-HDAg和HBsAg相互作用，輸出到細胞質(zhì)并包裹在HBV包膜中。HDV顆粒通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體分泌途徑釋放。除了依賴HBV包膜的感染方式，HDV還可以在有絲分裂期間直接在細胞之間轉(zhuǎn)移可復制的HDV RNA[11]。HDV有8種基因型，同一基因型分離株之間的差異小于16%，而不同基因型分離株差異可高達40%[12]。HDV的這一特征也是導致HDV RNA檢測困難的主要原因之一。

3 HDV RNA檢測的臨床意義

HDV感染形式有2種。(1)合并感染：HDV和HBV同時感染宿主引起急性病毒性肝炎；(2)雙重感染：HBsAg攜帶者或慢性HBV感染者重復感染HDV導致慢性病毒性肝炎[13]。與慢性乙型肝炎相比，重疊感染HDV的患者發(fā)生肝硬化、肝功能失代償以及肝細胞癌的風險增加2倍，在慢性乙型肝炎、肝硬化及肝細胞癌人群中，HDV的流行率分別高達26.75%、25.77%和19.80%[14]。

HDV有獨特的肝內(nèi)傳播方式。其需要HBV編碼的包膜蛋白進行傳播和重新進入肝細胞，HDV也可以通過細胞分裂傳播。進入肝細胞后，HDV RNA的復制中間體被模式識別受體MDA5感知，誘導IFNβ/λ分泌。IFN的分泌強烈抑制了HDV基因組細胞分裂介導的肝內(nèi)病毒傳播。然而IFN不能影響靜止期肝細胞中的HDV RNA復制。因此在HDV的臨床治療中，IFNα/λ單藥治療有效，但很少能清除HDV。HDV感染途徑及肝內(nèi)復制方式的廣泛研究，明確了治療HDV的關鍵在于降低HDV滴度和HBsAg水平。既往HDV感染者的治療方式以PEG-IFNα治療為主，但是PEG-IFNα治療效果差，只有約20%的患者出現(xiàn)治療應答，且?guī)淼闹T多副作用也增加了治療難度[15]。近年來，3類新型抗HDV藥物先后進行了臨床試驗，分別為進入肝細胞抑制劑Bulevirtide(BLV)、戊烯化抑制劑(LNF)和HBsAg分泌抑制劑(核酸多聚體REP2139)。其中BLV已于2020年在歐洲作為治療HDV的藥物獲批上市。BLV可模仿L-HBsAg的NTCP受體結合結構域，抑制HBV/HDV進入肝細胞。研究[16]表明，BLV單獨用藥或與IFN等聯(lián)合使用均可明顯降低血清中HDV的病毒載量。皮下注射BLV 24周以上，68%~72%的患者出現(xiàn)HDV RNA載量降低(≥2 log10 IU/mL)，但BLV不能降低HBsAg的水平。新型藥物單獨或與IFN的聯(lián)合使用或許能為HDV患者帶來治愈的曙光。

盡管HDV感染的潛在機制尚不完全清楚，但HDV負荷量可以在一定程度上影響肝臟疾病的進程。此外，目前尚無有效的HDV治療方法。因此，亟需開發(fā)一種經(jīng)濟、靈敏且特異性強的HDV RNA檢測方法，以監(jiān)測疾病的發(fā)生發(fā)展和評價治療效果。

4 HDV血清學檢測方法及其不足

從傳統(tǒng)意義上來說，病毒性疾病的診斷依賴于直接通過檢測完整病毒或其成分(蛋白質(zhì)或核酸)或通過間接血清學檢查以檢測病毒抗原或抗體。在HDV被發(fā)現(xiàn)后不久，相應的抗原/抗體檢測方式被迅速研發(fā)。目前，抗體檢測常被用作HDV感染的初步篩查，通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)或放射免疫測定檢測HDAg抗體，通常檢測抗-HD IgM和抗-HD IgG。在出現(xiàn)癥狀后的2~3周可檢測到抗-HD IgM，在急性HDV感染2個月后消失[17]。然而，在慢性HDV感染者急性發(fā)作期間，患者的抗-HD IgM也會升高，因此檢測抗-HD IgM不能明確區(qū)分急性和慢性HDV感染。急性HDV感染者的緩解期和慢性HDV感染者均出現(xiàn)抗-HD IgG，在病毒清除后抗體可持續(xù)存在較長時間，因此難以區(qū)分HDV的現(xiàn)癥感染和既往感染。因此目前認為HDV RNA檢測陽性是確診HDV的金標準。檢測HDV RNA的方法如聚合酶鏈式反應(PCR)，具有高特異性、高靈敏度的特點。除了具有極高的診斷價值，HDV RNA的病毒載量檢測對于鑒別HDV基因型、確定治療方案、追蹤治療效果等方面亦具有較高的指導意義。因此WHO推薦所有HDV抗體陽性的患者均應進行HDV RNA檢測。

5 HDV RNA檢測的方法及局限性

5.1   逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)

PCR技術是分子生物學最偉大的成就之一，由Kary B. Mullis在1983年發(fā)明，并因此獲得了1993年的諾貝爾獎。RT-PCR原理是在體外模擬遺傳物質(zhì)的天然復制，以微量的核酸模板擴增得到大量的特定DNA片段。1985年，Randall K. Saiki等研究者首次將PCR技術用于臨床疾病診斷，其使用PCR技術檢測鐮狀細胞性貧血和β-地中海貧血。此后，PCR也被用于HDV檢測。1990年，法國學者Zignego等[18]發(fā)表相關研究，確定了應用PCR技術進行HDV RNA檢測、克隆和測序的可行性，證明了PCR在診斷HDV感染、快速合成HDV探針和分析病毒遺傳變異方面具有重要價值。同一年，西班牙學者Madejón等[19]驗證了RT-PCR檢測HDV RNA在臨床中的可行性。該研究通過檢測梯度稀釋的HDV RNA，用RT-PCR產(chǎn)物進行Southern印記雜交，證明RT-PCR檢測比狹縫雜交技術(slot-blot hybridization)靈敏10 000倍。該團隊繼續(xù)將RT-PCR技術應用于臨床，進行了更大數(shù)量的臨床標本驗證，發(fā)現(xiàn)慢性HDV感染過程中不同HDV復制水平以及低水平的HDV復制與ALT之間存在相關性，表明PCR技術在檢測HDV復制中具有重要的應用價值[20]。越來越多的研究者將PCR應用于HDV的研究，HDV RNA檢測的靈敏度和特異度不斷提升，操作步驟也被逐漸優(yōu)化。

5.2   實時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-qPCR)

為進一步提高PCR的精準度及實現(xiàn)核酸定量，研發(fā)了RT-qPCR技術。RT-qPCR是指在PCR反應中加入熒光物質(zhì)，通過檢測熒光信號來實時判斷核酸擴增情況，而后通過Ct值和標準曲線對模板RNA進行定量分析，以達到對樣品進行實時定量檢測的目的。根據(jù)熒光信號來源的不同，可分為熒光染料法(SYBR Green)和探針法(Taqman)。染料法成本較低，應用廣泛；探針法靈敏性和特異性更強，但成本相對較高。迄今為止，RT-qPCR實驗方法成熟，在核酸檢測領域應用廣泛，也有公司在該方法的基礎上生產(chǎn)商品化試劑盒。盡管RT-qPCR在多種核酸檢測中表現(xiàn)出良好的特異性和靈敏性，但是由于HDV基因型多(8種)，各基因型間的序列差異較大、二級結構牢固、GC含量和互補性高以及HDV存在高度遺傳變異性，設計涵蓋所有基因型的引物和探針具有極大的挑戰(zhàn)性，因此HDV RNA檢測的進展緩慢。

2004年日本學者Yamashiro等[21]首次使用RT-qPCR檢測了48例HBsAg和丁型肝炎抗體陽性患者血清中的HDV RNA，不僅證明了RT-qPCR(染料法)在臨床檢測中應用的可能，還發(fā)現(xiàn)慢性肝炎和肝硬化患者血清中HDV RNA水平明顯高于無癥狀患者，提示血清HDV RNA的病毒載量與肝病不同進程存在相關性。然而該研究設計的引物僅能檢測HDV-2型和HDV-4型，且所用的臨床樣本量少。2005年，法國學者Le Gal等[22]進一步改進了反應體系，建立了Taqman探針法檢測HDV RNA，可對所有基因型進行檢測，且靈敏度高，可達到100拷貝/mL，并納入了更多血清樣本(共160例，其中包括IFN治療前后不同時間點的76例血清標本)進行驗證，研究結果顯示HDV RNA的檢測有助于幫助明確丁型肝炎患者治療前、治療中和治療后的病毒學特征，可用于慢性感染者治療方案管理以及HDV感染史的研究。此外RT-qPCR還可以用于大規(guī)模的前瞻性研究，以確定治療指南和評估新藥的治療效果。在后續(xù)的數(shù)十年內(nèi)，RT-qPCR技術被廣泛應用于HDV檢測，相關研究大量涌現(xiàn)，主要集中于以下5個方面。(1)用于HBV感染人群中HDV的篩查。各國家的研究者分別對韓國[23]、埃及[24]、巴基斯坦[25]、巴西[26]、澳大利亞[27]等國家及地區(qū)的HDV流行率進行評估，使人們逐漸意識到HDV的流行率被嚴重低估。(2)用于HDV基因型的檢測。確定了不同HDV基因型的流行區(qū)域[28]，并發(fā)現(xiàn)HDV-3型與肝病的不良結局存在相關性[29]。通過研究大量血清或肝組織樣本，證明了HDV RNA病毒載量與暴發(fā)性肝炎、肝衰竭和肝細胞癌的發(fā)生密切相關[14]。(3)用于監(jiān)測IFN治療效果及新藥治療效果的臨床驗證。證明了足療程、足量使用IFN或與其他藥物聯(lián)用可以降低HDV病毒載量[30-31]，也證明了新型抗HDV藥物BLV、LNF和核酸多聚體REP213均具有良好的治療效果[16]。(4)用于HDV病毒譜的分析[32]和HDV全基因組測序[33]，為理解HDV重組和明確HDV感染機制提供了幫助。(5)各研究者或公司用于研發(fā)商業(yè)檢測試劑盒?？蓪崿F(xiàn)標準化的一步實時逆轉(zhuǎn)錄，從臨床樣本中快速、精準、定量檢測HDV[34]。

RT-qPCR檢測是一種成熟的檢測病毒核酸的方法，但在HDV的檢測中存在一些缺陷。RT-qPCR檢測進行RNA定量需要標準品及標準曲線。多數(shù)已發(fā)表的研究使用的陽性標準品是HDV質(zhì)粒，但這并不能評估逆轉(zhuǎn)錄的步驟。也有研究者[35]使用體外合成的RNA作為陽性標準品，雖然該方法可以評估逆轉(zhuǎn)錄的步驟，但合成的RNA沒有牢固的二級結構，HDV基因組的二級結構會影響HDV病毒載量的定量檢測。雖然WHO已經(jīng)提出了HDV RNA檢測的國際標準，但檢測方法仍需要進行內(nèi)部優(yōu)化，需與待測核酸進行共純化、共擴增。有研究者[36]使用管家基因如β-actin和18S rRNA作為內(nèi)部對照，然而，這些RNA的濃度在不同臨床樣本中存在較大差異。此外，質(zhì)控產(chǎn)品的選擇也會影響HDV RNA定量的準確性。理想的核酸質(zhì)控產(chǎn)品不僅可以用于核酸檢測過程的質(zhì)量控制，也是評價檢測程序和對比不同實驗室結果的重要基礎。目前，RNA病毒的質(zhì)控產(chǎn)品多為裸露的RNA片段或完整的病毒顆粒。裸露的RNA片段很容易被環(huán)境中的RNase降解，而完整的病毒顆粒作為質(zhì)控樣品存在安全隱患。滅活藥物雖然可以降低傳染性，但病毒滅活試劑(如甲醛)會破壞病毒核酸，影響核酸的提取[37]。理想的RNA質(zhì)控產(chǎn)品應可以長期穩(wěn)定的保存RNA。裝甲RNA技術可以克服RNA的不穩(wěn)定性，已廣泛應用于RNA病毒核酸質(zhì)控產(chǎn)品的研究。2016年，國際上首次對血漿HDV RNA定量進行了外部質(zhì)量評估。對來自全球17個國家的28個實驗室進行綜合分析，結果表明，由于檢測技術和程序的差異以及設計的引物/探針目標區(qū)域的不同，結果具有高度異質(zhì)性[38]。因此，有必要建立一個國際通用的HDV RNA定量檢測體系。

5.3   逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導等溫擴增(RT-LAMP)

LAMP是1998年由日本Eiken Chemical公司研發(fā)，該技術改善了PCR的部分不足。與PCR相比，LAMP具有以下優(yōu)點：(1)反應快速、靈敏性高?？梢栽诙虝r間內(nèi)(＜1 h)將DNA的擴增數(shù)量增加到10億，而PCR只能擴增到100萬。(2)不依賴大型儀器或設備。LAMP可以不依賴大型儀器設備，僅需要干式加熱器或水浴鍋進行加熱即可進行反應。(3)特異性高。LAMP的優(yōu)點在于其高特異性，這是由于LAMP需要使用4~6種引物，可以識別DNA模板上8個以上的特定位點，相比之下，PCR只能識別2個位點。(4)結果判讀方便。LAMP的產(chǎn)物可以在反應結束后立即用肉眼觀察，甚至在反應進行時也可以觀察到(如產(chǎn)生肉眼可見的白色沉淀)，而不需要任何額外的步驟。盡管LAMP已經(jīng)用于多種病毒和基因檢測，但其在HDV RNA檢測方面仍屬新方法，這與HDV RNA基因型多、引物設計困難有關。Wang等[39]建立了RT-LAMP檢測方法，特異性檢測HDV-1型，該方法反應體系僅需在65 ℃下反應50 min，檢測下限為75 fg/μL，與常規(guī)的定性或定量PCR相比，RT-LAMP檢測靈敏度提高了1 000倍，且方法特異性高，與HIV、HAV、HBV、HCV、HEV等病毒無交叉反應。雖然與PCR相比，該方法具有快速、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，但其只針對了HDV-1型，且依賴加熱設備維持反應溫度，因此仍需進一步優(yōu)化實驗條件以實現(xiàn)HDV核酸即時檢測。

5.4   微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)

ddPCR是在傳統(tǒng)定量qPCR基礎上研發(fā)的新一代技術，可以對RNA進行定量。ddPCR的主要原理是利用微流控技術生成油包水乳化微滴顆粒，以每個油包水的微滴小顆粒作為反應體系，進行PCR擴增及后續(xù)熒光檢測。與96孔/384孔qPCR相比，ddPCR可以增加反應體系的數(shù)量，精簡操作步驟。ddPCR具有技術成熟、靈敏度高等優(yōu)點，是目前應用最廣泛的PCR技術之一。ddPCR的關鍵步驟有微滴生成、微滴操控、微滴檢測。ddPCR微滴發(fā)生器可將帶熒光的PCR反應體系分隔成數(shù)千甚至上萬個納升級的微滴，RNA分子在各微滴顆粒中隨機分布，每個微滴顆粒都是一個獨立的PCR反應體系。經(jīng)PCR擴增后，分析儀對每個微滴顆粒進行檢測，將熒光模擬信號數(shù)字化，有熒光信號的微滴判讀為“1”，無熒光信號的微滴判讀為“0”；根據(jù)泊松分布原理以及陽性微滴的比例，最終通過分析軟件直接給出目標核酸分子的拷貝數(shù)濃度，因此不需要檢測熒光信號與設定閾值線的交點，完全不依賴于Ct值的鑒定，所以ddPCR受擴增效率的影響大幅度降低，對PCR反應抑制物的耐受能力大幅度提高[40-41]。與qPCR相比，ddPCR具有以下優(yōu)點：(1)ddPCR的定量不需要標準曲線；(2)ddPCR檢測RNA比qPCR具有更高的靈敏性和特異性。目前ddPCR的相關方法建立及臨床驗證已陸續(xù)在HIV、HBV以及新冠病毒中開展[41-43]。

2022年，先后有兩項研究[44-45]通過ddPCR技術建立了HDV RNA的檢測方法并進行了臨床驗證。意大利學者Olivero等[44]檢測HDV質(zhì)粒及20例HDV陽性患者的血清樣本，對比了RT-qPCR與ddPCR的靈敏性及特異性。結果發(fā)現(xiàn)在使用相同引物和探針(涵蓋HDV的8種基因型)的情況下，RT-qPCR與ddPCR的靈敏性、特異性和檢測下限相似。然而在研究中，ddPCR的檢測范圍與RT-qPCR存在差異。RT-qPCR的線性范圍為1×10~1×108 IU/mL，ddPCR定量線性動態(tài)范圍為1×10~1×106 IU/mL。這與ddPCR的定量方式有關，在較高的RNA濃度下(1×107和1×108 IU/mL)，反應被過量的目標分子飽和，而檢測到的陰性樣本量較少，無法應用泊松分布來計算起始樣品中靶分子的含量。同年，我國學者Xu等[45]通過使用ddPCR檢測梯度稀釋的HDV全基因型的通用質(zhì)粒(pMD19T)，證明所建立方法的檢測下限(0.29 IU/mL vs 650.00 IU/mL)和定量檢測下限(76 IU/mL vs 7 315.82 IU/mL)均優(yōu)于RT-qPCR。該研究同時使用ddPCR和RT-qPCR檢測44例(30例HDV感染和14例HBV感染)患者血清樣本，證明ddPCR的特異性優(yōu)于RT-qPCR(24/44 vs 10/44)。此外，Xu等還應用3種檢測方法(ELISA、RT-qPCR及ddPCR)對728例HBV陽性患者的血清樣本進行了HDV篩查，在慢性乙型肝炎、肝硬化、肝細胞癌和，ELISA檢測的HDV抗體陽性率分別為1.1%、3.3%、2.7%和7.1%，RT-qPCR檢測HDV RNA陽性率分別為0、16.67%、15.4%和20%，ddPCR檢測HDV陽性率分別為0、33.33%、30.77%和60%。證明ddPCR和RT-qPCR的技術性能具有高度的可比性，并且提示在肝衰竭患者中存在更高的HDV陽性率。以上研究表明，ddPCR是一種可重復性高、不需要標準曲線以及操作簡便的方法，具有廣闊的臨床應用前景。

6展望

越來越多的流行病學研究表明，HDV的全球患病率遠高于先前的估計值。HDV感染的快速實驗室診斷對于識別、監(jiān)測和控制疾病傳播具有重要的意義。RNA檢測是診斷HDV的金標準，亦是監(jiān)測HDV治療效果的重要指標。目前，不同的HDV RNA檢測方法靈敏度差異較大，主要原因在于缺乏國際統(tǒng)一的標準來比較不同實驗室之間的檢測結果。不同實驗室及技術人員在HDV RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄和定量等一系列操作過程中存在差別，因此需要開發(fā)新的檢測方法，建立標準化程序，例如樣本類型、提取方法、引物/探針設計、使用儀器和報告數(shù)據(jù)方式等，以進一步提高靈敏度和特異度，降低假陰性率，更早地識別丁型肝炎患者，及時控制HDV傳播。

此外，低收入和中等收入國家或地區(qū)的醫(yī)療保健體系不完善，對HDV的認識不足，普及HDV感染的嚴重性，進行HDV篩查，以推動丁型肝炎的早期檢測、早期診斷、早期治療，對降低丁型肝炎的危害，減輕醫(yī)療負擔有重大意義。部分HDV的高發(fā)區(qū)地處偏遠，缺乏大型儀器設備和專業(yè)人員進行檢測，因此研發(fā)快速、便捷、不依賴儀器設備及對檢測人員要求低的HDV檢測新方法，以實現(xiàn)HDV的即時檢測，是未來的主要研發(fā)重點。