基孔肯雅熱實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案

一、標(biāo)本的采集

（一）患者標(biāo)本的采集。

急性期血清：發(fā)病1周內(nèi)，無菌靜脈采集非抗凝血5ml。

恢復(fù)期血清：發(fā)病后2至 3周或以上，無菌靜脈采集非抗凝血5ml。

（二）伊蚊標(biāo)本的采集。

在本病暴發(fā)或流行期間，采集疫點(diǎn)的伊蚊成蚊和幼蟲，用于病原學(xué)檢測(cè)。

二、標(biāo)本的保存與運(yùn)輸

血液標(biāo)本采集后，在4℃條件下盡快運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分離并保存。

血清標(biāo)本可置于-20℃冰箱短期保存，長期保存須置-70℃以下。

標(biāo)本運(yùn)輸按照衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》的規(guī)定執(zhí)行。

三、檢測(cè)方法

常用檢測(cè)方法主要有3種：血清學(xué)檢測(cè)、核酸檢測(cè)和病毒分離。一般情況下，病毒分離與核酸檢測(cè)宜采用發(fā)病后1周內(nèi)的血清； IgM抗體檢測(cè)宜采用發(fā)病4天后的血清，IgG抗體的檢測(cè)宜采用發(fā)病1周后的血清。

（一）血清學(xué)檢測(cè)方法。

1. 特異性IgM檢測(cè)。

   采用的方法有：捕獲ELISA法（MacELISA）、間接ELISA法、免疫熒光法和免疫層析法等。

2. 特異性IgG檢測(cè)。

   采用的方法有：間接ELISA法、免疫熒光法和免疫層析法等。

3. 意義

   （1）IgM陽性結(jié)果，表明患者新近CHIKV感染，用于基孔肯雅熱早期診斷。

   （2）IgG陽性結(jié)果，表明曾受到CHIKV感染；恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。

（二）病原學(xué)檢測(cè)方法。

1. 基孔肯雅病毒核酸檢測(cè)。

   一般發(fā)病后7日內(nèi)在多數(shù)患者的血清中可檢測(cè)到病毒核酸。凍存伊蚊標(biāo)本也可進(jìn)行基孔肯雅病毒核酸檢測(cè)?？刹捎肦T-PCR和Real-time RT-PCR等核酸擴(kuò)增的方法檢測(cè)。

2.  病毒分離鑒定。

   常用Vero、C6/36等敏感細(xì)胞系開展病毒分離，分離物可以免疫熒光法或核酸檢測(cè)進(jìn)行鑒定。

3. 意義。

   患者血清中分離到基孔肯雅熱病毒和/或檢測(cè)到病毒核酸后，可確診基孔肯雅熱病毒感染。