分子診斷不得不考慮！樣本運(yùn)輸穩(wěn)定性、保存條件

進(jìn)行臨床分子診斷的標(biāo)本,在采集后,其核酸(DNA,RNA)的穩(wěn)定性與采集的容器、標(biāo)本類別、環(huán)境溫度、運(yùn)輸條件和儲(chǔ)存狀態(tài)等密切相關(guān),核酸的穩(wěn)定性是影響分子診斷檢測(cè)結(jié)果的重要因素。因此,對(duì)標(biāo)本的穩(wěn)定性的質(zhì)量控制是分析前質(zhì)量管理的必要因素之一。

比如說外周血是最常用的分子診斷原始樣本,包含全血、血清、血漿、淋巴細(xì)胞層等多種血液成分,如果用于RNA檢測(cè)，就必須要考慮到RNA的降解,大多數(shù)條件下推薦直接添加RNA穩(wěn)定劑，而用于DNA分析的全血樣本穩(wěn)定性的考量就相對(duì)弱一些。

但是近些年無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）、循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）等新項(xiàng)目陸續(xù)的出現(xiàn)，對(duì)于血液樣本穩(wěn)定性的要求更高。

隨著分子技術(shù)的發(fā)展，以干血片標(biāo)本檢測(cè)技術(shù)為核心的POCT模式也是日益受到重視，這主要得益于干血片樣本室溫條件下細(xì)胞內(nèi)DNA可穩(wěn)定至少19個(gè)月以上，解決了樣本運(yùn)輸穩(wěn)定性的問題。

近些年分子病理學(xué)的發(fā)展對(duì)于組織樣本DNA和RNA的鑒定需求也是逐漸增大，但是組織樣本運(yùn)輸條件苛刻，基因檢測(cè)往往效果不佳，而石蠟包埋組織中的DNA在室溫即可保持穩(wěn)定，卻不推薦石蠟包埋組織用于RNA研究。

樣本的運(yùn)輸條件

1、全血/血漿/血清/干血片

DNA: 24h內(nèi)可室溫運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室，72h內(nèi)運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室置于2-8℃條件，72h及更長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸需要在-20℃條件下。

RNA：4h內(nèi)分離血漿，5d內(nèi)能夠運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室可保存在2-8℃，5d及更長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸時(shí)需在-20℃條件下。

干血片可在室溫下運(yùn)輸。

2、支氣管肺泡灌洗液

24h內(nèi)可室溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，72h內(nèi)需在2-8℃冷藏運(yùn)輸，72h及更長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)輸需采用-70℃或?yàn)楦鼑?yán)格的條件。

骨髓

骨髓標(biāo)本應(yīng)在2-8℃條件下運(yùn)輸，如果用于RNA分析，應(yīng)該添加RNA穩(wěn)定劑。

3、口頰細(xì)胞

 室溫條件下，核酸在口頰細(xì)胞中可穩(wěn)定存在1周，可室溫運(yùn)輸，檢測(cè)RNA，需放置在RNA穩(wěn)定劑中。

4、淋巴細(xì)胞層

從血液里分離的淋巴細(xì)胞，需在2-8℃冷藏運(yùn)輸，無法及時(shí)提取時(shí)應(yīng)放置-70℃以下儲(chǔ)存。

5、腦脊液

DNA病毒檢測(cè): 需在2-8攝氏度條件下運(yùn)輸，應(yīng)該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下。

RNA分析：立即置于冰上降溫，并置于干冰上運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室。

6、細(xì)針抽取物

DNA病毒檢測(cè): 需在2-8攝氏度條件下運(yùn)輸，應(yīng)該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下。

RNA分析：立即置于冰上降溫或置于RNA穩(wěn)定劑中進(jìn)行運(yùn)輸。

7、組織

DNA分析：新鮮組織應(yīng)該立即置于冰上速冷，并保持在冰上運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室

RNA分析：新鮮組織采集后立即采用液氮速凍，并置于干冰上運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室

深圳市麥瑞科林科技有限公司生產(chǎn)的DNA保存液，可常溫保存1周以上時(shí)間，低溫保存效果更加。

8、痰液

30min內(nèi)可在室溫下運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，否則應(yīng)在4-8℃條件下運(yùn)送

9、糞便

加有防腐劑的樣本可在室溫下運(yùn)輸，未加防腐劑的樣本需要在2-8℃條件下運(yùn)輸。

10、宮頸拭子和尿道拭子

在宮頸拭子和尿道拭子采樣完成后，需要把樣本放入的HPV保存液中運(yùn)輸，深圳市麥瑞科林科技有限公司生產(chǎn)的HPV保存液，可常溫保存1周以上時(shí)間，低溫保存效果更加。

11、其他

 其他樣本可參考用于DNA或RNA檢測(cè)項(xiàng)目來選擇最適宜的運(yùn)輸條件。

參考資料：李艷、李金明《臨床分子診斷 分析前與分析后》