唾液采集器試劑盒如何提高 DNA 質(zhì)量和穩(wěn)定性？

通過非侵入性的郵寄 DNA 采樣，唾液采集器試劑盒正在改變遺傳學(xué)和流行病學(xué)研究。本文探討了 Oragene 套件與頰拭子等其他方法在 DNA 產(chǎn)量、質(zhì)量、穩(wěn)定性和易用性等關(guān)鍵指標方面的比較。

什么是唾液采集套裝，為什么要使用它們？

唾液采集試劑盒是一種用于輕松、無創(chuàng)地采集唾液樣本進行 DNA 分析的裝置。它們在大型流行病學(xué)研究中越來越受歡迎，因為與傳統(tǒng)的血液采集相比，它們具有多項優(yōu)勢。唾液采集簡單、無痛，而且不需要訓(xùn)練有素的工作人員，因此可以很容易地從大量人群中采集樣本或由參與者寄回樣本。與抽血相比，非侵入性也提高了依從性和隨訪率。唾液中含有各種生物標志物和細胞，可用于評估 DNA 質(zhì)量和產(chǎn)量，以便進行基因分型和其他基因分析?？傊僖翰杉噭┖泻喕撕笄诠ぷ?，擴大了基因研究的可能性。

唾液采集方法的 DNA 產(chǎn)量如何？

一個關(guān)鍵的考慮因素是不同的采集方法和試劑盒在下游 DNA 分析中的表現(xiàn)如何。研究將奧拉基因唾液試劑盒的產(chǎn)量與其他非侵入性技術(shù)（如頰拭子、細胞刷、口腔沖洗和被動流口水）進行了比較。Oragene 套件的總 DNA 產(chǎn)量一直最高，每個樣本的中位數(shù)約為 110-180 μg，是其他方法的 3-12 倍。例如，在一項對 17 名成人進行的交叉研究中，Oragene 唾液的中位產(chǎn)量為 181 μg，而口腔漱口水為 36 μg，拭子和刷子為 10-13 μg。Oragene 的高產(chǎn)率歸功于其穩(wěn)定緩沖液，它能溶解細胞并防止降解。口腔沖洗液和口水的表現(xiàn)也相當不錯。不過，細胞刷和頰拭子提供的 DNA 通常不足以滿足微衛(wèi)星基因分型等應(yīng)用的需要，因此需要每個受試者使用多個拭子?？偟膩碚f，Oragene 唾液和口腔漱口水的 DNA 產(chǎn)量最高，也最穩(wěn)定。

不同采集方法的 DNA 質(zhì)量如何？

除了總產(chǎn)量，DNA質(zhì)量對基因分型的準確性也至關(guān)重要。重要的指標包括純度比（如 A260/280 和 A260/230）、PCR 成功率和凝膠電泳的完整性。同樣，Oragene 唾液和口腔漱口水的結(jié)果最好，A260/280 比率在理想的 1.7-1.8 范圍內(nèi)，表明蛋白質(zhì)污染較少。頰拭子和刷子的結(jié)果較差，純度比低得多，表明污染程度較低。奧拉基因唾液的 PCR 擴增率為 99%，口腔漱口水的 PCR 擴增率為 98%，明顯高于細胞刷和拭子的 75-84%，因為細胞刷和拭子在擴增較長的擴增子時會出現(xiàn)問題。Oragene 穩(wěn)定試劑似乎是在室溫下保持 DNA 完整性和純度的關(guān)鍵。就產(chǎn)量和質(zhì)量而言，Oragene 唾液和口腔沖洗液都優(yōu)于頰拭子。

樣本采集方法如何影響唾液流速？

一個重要的變量是采集方法如何影響唾液流速和總蛋白水平，這可能會影響分析物濃度。被動口水和拭子的非刺激流速最低，約為 0.5 毫升/分鐘。拭子和刷子的機械刺激流速較高，為 1-1.5 mL/min。Oragene 的檸檬酸緩沖液因其 pH 值呈酸性，流速最高，約為 2.5 mL/min。不同方法的總蛋白水平差異不大，但 Oragene 方法的總蛋白水平較低，這可能是因為它的高流量稀釋了蛋白質(zhì)。研究人員應(yīng)根據(jù)所需的流速和分析物濃度進行標準化采集。

奧拉金唾液的室溫儲存耐受性如何？

奧拉金唾液的一個關(guān)鍵實用優(yōu)勢是，由于它采用了生物穩(wěn)定緩沖液，因此在室溫下可長期保持穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn)，在室溫下保存長達 8 個月的 Oragene 樣品中，DNA 產(chǎn)量和質(zhì)量都沒有下降。即使在室溫下保存 8 個月后，A260/280 純度比仍然理想，PCR 擴增率也達到 98-99%。這與口腔沖洗DNA在未保存10天后就會降解形成鮮明對比。Oragene 的穩(wěn)定性簡化了大型遠程研究的樣本采集、儲存和運輸。不過，如果要保存一年以上，可能仍然需要冷凍，以防止干燥。總的來說，Oragene 的緩沖液可在室溫下保持 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量至少 8 個月。

唾液采集方法有哪些局限性？

雖然唾液采集有很多優(yōu)點，但也有一些局限性需要考慮。紫外分光光度法等定量方法無法區(qū)分微生物和食物殘渣中的人類 DNA 和非人類 DNA。唾液產(chǎn)量也會隨年齡、性別、水合狀態(tài)和其他因素而變化。唾液分析物的晝夜變化還沒有得到很好的描述。最后，現(xiàn)場采樣與上門采樣可能會產(chǎn)生不同的參與率和返回率，這對可行性非常重要。對這些參數(shù)的更多研究將優(yōu)化大型流行病學(xué)生物庫研究的方案。

總之，唾液采集試劑盒提供了一種非侵入性方法，可為基因分型和生物庫研究獲取高質(zhì)量的 DNA。與抽血相比，唾液采集拓展了基因流行病學(xué)研究的可能性。Oragene 試劑盒在產(chǎn)量、純度、穩(wěn)定性和易用性等關(guān)鍵指標方面表現(xiàn)良好?？谇粵_洗也有很好的表現(xiàn)，但頰拭子和刷子有其局限性。標準化和優(yōu)化采集方法對于最大限度地提高人口基因組學(xué)的 DNA 質(zhì)量和參與率至關(guān)重要。

References

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