口腔拭子采集DNA樣本的優(yōu)勢(shì)和操作指南

什么是口腔拭子，如何采集？

口腔拭子是一種從人體口腔采集樣本的棉簽，在進(jìn)行口腔拭子檢查時(shí)，醫(yī)療服務(wù)提供者會(huì)用拭子輕輕擦拭臉頰內(nèi)側(cè)，以收集頰上皮細(xì)胞。這是一種相對(duì)非侵入性的 DNA 樣本采集方法，可用于基因檢測(cè)或法醫(yī)分析。

口腔拭子采集套裝通常包含海綿拭子或植絨拭子、保存液管、手套、標(biāo)簽和說(shuō)明書。用拭子擦拭臉頰內(nèi)側(cè)并摩擦 5-10 秒鐘以收集細(xì)胞，注意不要讓拭子尖端接觸到臉頰內(nèi)側(cè)以外的任何表面。然后將拭子放入收集管中，晾干并貼上標(biāo)簽。口腔拭子采集可由醫(yī)療服務(wù)提供者完成，也可由個(gè)人按照簡(jiǎn)單的說(shuō)明自行完成。這種方法快速、無(wú)痛，而且能采集到高質(zhì)量的 DNA。

口腔拭子可用于哪些類型的樣本和下游分析？

口腔拭子通常用于臨床、法醫(yī)和研究環(huán)境中的 DNA 檢測(cè)和分析。在臨床中，口腔拭子可為新生兒篩查、親子鑒定、腫瘤風(fēng)險(xiǎn)測(cè)試和藥物基因測(cè)試等基因測(cè)試提供 DNA。口腔拭子易于從任何年齡的成人和兒童身上采集。在法醫(yī)學(xué)中，口腔拭子中的觸摸 DNA 與從犯罪現(xiàn)場(chǎng)收集的 DNA 匹配后，可以確定或排除嫌疑人。口腔拭子還廣泛用于涉及遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)、基因表達(dá)和蛋白質(zhì)組學(xué)的生物醫(yī)學(xué)研究。

口腔拭子采集的高質(zhì)量 DNA 與多種下游應(yīng)用兼容，包括 PCR、芯片、測(cè)序、基因分型和質(zhì)譜分析。與血液樣本相比，口腔拭子提供的上皮細(xì)胞 DNA 更純凈，白細(xì)胞污染更少。從口腔拭子中分離出的完整、高分子量 DNA 在長(zhǎng)程 PCR 等技術(shù)中表現(xiàn)出色。

使用口腔拭子的優(yōu)勢(shì)是什么？

口腔拭子有許多優(yōu)點(diǎn)，是采集 DNA 樣本的首選方法：

1. 無(wú)創(chuàng)無(wú)痛。拭取臉頰內(nèi)側(cè)既簡(jiǎn)單又舒適。

2. 方便簡(jiǎn)單?？筛鶕?jù)基本說(shuō)明自行采集樣本。

3. 老少皆宜。口腔拭子可用于成人、兒童、嬰兒和老人。

4. 純凈的 DNA。與血液相比，口腔拭子細(xì)胞產(chǎn)生的 DNA 質(zhì)量高，細(xì)胞異質(zhì)性小。

5. 儲(chǔ)存穩(wěn)定。口腔拭子中的 DNA 在室溫下保持穩(wěn)定，便于運(yùn)輸和儲(chǔ)存。

6. DNA 產(chǎn)量高。用力拭擦可最大限度地回收上皮細(xì)胞和 DNA 數(shù)量。

7. PCR 兼容性。完整的高分子量 DNA 在 PCR 和測(cè)序中表現(xiàn)非常出色。

8. 成本效益高。與抽血或活檢相比，口腔拭子采集成本更低。

口腔拭子的非侵入性、便利性和出色的 DNA 產(chǎn)量使其成為大多數(shù) DNA 采集應(yīng)用的首選方法。

口腔拭子與其他 DNA 來(lái)源相比有何優(yōu)勢(shì)？

雖然口腔拭子被廣泛使用，但研究人員往往不得不在口腔拭子、血液、唾液或其他 DNA 來(lái)源之間做出選擇。區(qū)分口腔拭子的關(guān)鍵因素包括

1. 細(xì)胞成分： 與血液不同，口腔拭子提供的是純上皮細(xì)胞 DNA，白細(xì)胞污染少。唾液中也含有頰上皮細(xì)胞和白細(xì)胞的混合物。

2. DNA 質(zhì)量：來(lái)自口腔拭子的高分子量 DNA 在 PCR、測(cè)序和其他下游應(yīng)用中表現(xiàn)良好。而其他來(lái)源的 DNA 可能會(huì)比較破碎。

3. 樣本采集： 口腔拭子需要在臉頰內(nèi)進(jìn)行非侵入性擦拭。血液需要靜脈穿刺，唾液則需要吐入試管。

4. 樣本穩(wěn)定性： 與唾液不同，口腔拭子中的 DNA 在室溫下運(yùn)輸和儲(chǔ)存時(shí)保持穩(wěn)定。如果保存不當(dāng)，血液樣本的 DNA 也會(huì)隨著時(shí)間的推移而降解。

5. 受試者舒適度： 抽血會(huì)讓受試者感到不舒服。口腔拭子和唾液采集則相對(duì)舒適。

在大多數(shù)應(yīng)用中，口腔拭子具有上皮細(xì)胞純度高、DNA 質(zhì)量好、穩(wěn)定性強(qiáng)、受試者舒適等優(yōu)點(diǎn)，是采集 DNA 樣本的首選，而不是血液或唾液。不過(guò)，在涉及蛋白質(zhì)組學(xué)或代謝物的研究中，唾液可能是首選。

哪些因素會(huì)影響口腔拭子的 DNA 產(chǎn)量和質(zhì)量？

雖然口腔拭子能提供高質(zhì)量的 DNA，但必須采取一些預(yù)防措施來(lái)最大限度地提高 DNA 的產(chǎn)量和純度：

1. 拭取技術(shù)： 用力拭擦可最大限度地收集細(xì)胞和提高 DNA 產(chǎn)量。輕拭可回收較少的細(xì)胞。

2. 拭子類型： 與傳統(tǒng)棉簽相比，植絨棉簽或泡沫棉簽?zāi)苁占歪尫鸥嗉?xì)胞。

3. 口腔健康： 牙齦炎引起的炎癥會(huì)增加口腔樣本中的白細(xì)胞污染。

4. 采集前進(jìn)食/飲水： 食物殘?jiān)鼤?huì)污染拭子樣本，因此受試者在采集前不應(yīng)進(jìn)食或飲水。

5. 吸煙： 吸煙產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)會(huì)沉淀和破碎 DNA，因此應(yīng)在吸煙至少 30 分鐘后采集口腔樣本。

6. 樣本處理： 讓咽拭子風(fēng)干可防止進(jìn)一步處理前的 DNA 降解。

遵循口腔拭子采集、處理和加工的最佳實(shí)踐可確保下游分析獲得最高的 DNA 純度和產(chǎn)量。

使用什么技術(shù)從口腔拭子中分離 DNA？

從口腔拭子中提取和純化 DNA 主要有兩種方法：

傳統(tǒng)的 DNA 提取試劑盒利用蛋白酶 K 消化，然后進(jìn)行酒精沉淀或柱吸附來(lái)分離 DNA。這些試劑盒雖然有效，但涉及多個(gè)試管和步驟。

新型試劑盒采用新型固相化學(xué)方法，只需一步就能直接從拭子中提取 DNA，從而減少了操作時(shí)間和塑料廢棄物。例如，Echoloation 提取技術(shù)只需一步就能裂解細(xì)胞并將 DNA 與基質(zhì)結(jié)合，無(wú)需使用有害的混沌提取物。

在傳統(tǒng)和新型試劑盒中，純化的 DNA 被洗脫到與 PCR 和測(cè)序等下游應(yīng)用兼容的低鹽緩沖液中。選擇優(yōu)化的 DNA 純化策略可最大限度地提高來(lái)自口腔拭子的 DNA 產(chǎn)量和質(zhì)量。

藥物基因檢測(cè)中如何使用口腔拭子？

藥物基因檢測(cè)分析基因差異如何影響藥物反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥。口腔拭子為藥物基因檢測(cè)提供了方便的 DNA 來(lái)源。例如，HLA-B*57:01 檢測(cè)使用口腔拭子 DNA 來(lái)篩查對(duì)艾滋病藥物阿巴卡韋的過(guò)敏性。其他藥物基因檢測(cè)也使用口腔拭子 DNA 樣品篩查華法林敏感性、阿片類藥物代謝和卡馬西平不良反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。口腔拭子的非侵入性采集和優(yōu)良的 DNA 使其成為藥物基因分析的理想選擇，而不是血液。

在研究中使用口腔拭子有哪些注意事項(xiàng)？

口腔拭子在生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，但也應(yīng)考慮一些因素：

- 口腔拭子樣本中的細(xì)胞異質(zhì)性會(huì)影響表觀遺傳學(xué)、基因表達(dá)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究。顯微鏡評(píng)估或生物信息學(xué)方法可幫助解釋細(xì)胞類型差異。

- 不同受試者的 DNA 產(chǎn)量因拭取技術(shù)和口腔健康狀況而異。標(biāo)準(zhǔn)化采集方法非常重要。

- 如果計(jì)劃進(jìn)行蛋白質(zhì)組分析，穩(wěn)定試劑有助于保存口腔樣本中的 RNA 和蛋白質(zhì)。

- 應(yīng)優(yōu)化 DNA 提取方法，最大限度地提高產(chǎn)量和純度。新穎的單步 DNA 提取試劑盒可節(jié)省時(shí)間和塑料廢棄物。

考慮到細(xì)胞的異質(zhì)性、優(yōu)化采集和穩(wěn)定方法以及選擇有效的 DNA 純化策略，口腔拭子可為各種研究應(yīng)用提供高質(zhì)量的 DNA。

口腔拭子是一種簡(jiǎn)單、非侵入性的高質(zhì)量 DNA 樣品采集方法。口腔拭子出色的 DNA 純度和產(chǎn)量使其成為各種遺傳、表觀遺傳、法醫(yī)、藥物遺傳和生物醫(yī)學(xué)研究應(yīng)用的理想選擇。按照優(yōu)化的口腔拭子采集和處理方案，研究人員和臨床醫(yī)生可以輕松獲得 DNA 樣本，用于精確的個(gè)性化分析和治療。

參考來(lái)源

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