Simoa技術(shù)： 優(yōu)化新冠病毒的核酸抗原測(cè)試

新冠疫情期間，需要準(zhǔn)確、快速的診斷檢測(cè)來(lái)識(shí)別和隔離感染者，雖然聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) 檢測(cè)法可檢測(cè)病毒 RNA 并作為黃金標(biāo)準(zhǔn)，但供應(yīng)限制和復(fù)雜性限制了該檢測(cè)法的使用。為了尋找替代方法，一個(gè)丹麥研究團(tuán)隊(duì)合作開發(fā)并優(yōu)化了核酸抗原檢測(cè)方法，利用了單分子陣列（Simoa）技術(shù)的靈敏度。他們的研究成果為實(shí)現(xiàn)與PCR檢測(cè)相當(dāng)?shù)目乖夸伷搅说缆贰?/p>

組建多學(xué)科團(tuán)隊(duì)

在丹麥研究部的資助下，該項(xiàng)目匯集了利勒貝爾特醫(yī)院生物化學(xué)系、免疫學(xué)系和臨床微生物學(xué)系的互補(bǔ)專長(zhǎng)。采樣耗材企業(yè)麥瑞科林提供了用于采集患者樣本的病毒采樣管，為化驗(yàn)開發(fā)提供了關(guān)鍵支持。

研究人員的目標(biāo)是利用 Simoa 的超靈敏抗原檢測(cè)技術(shù)，使新冠病毒診斷的準(zhǔn)確性達(dá)到 PCR 的水平。Simoa 的靈敏度是傳統(tǒng)免疫測(cè)定的1000倍，先前的研究表明，Simoa =有希望推動(dòng)傳染病檢測(cè)的發(fā)展。

通過(guò)合作取得進(jìn)展

我們首先從 Sino Biological 開始生產(chǎn)重組抗原和評(píng)估抗體，以優(yōu)化研究專用的核酸檢測(cè)方法。廣泛的優(yōu)化工作最大限度地減少了背景，同時(shí)最大限度地增加了信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了 0.02 pg/mL 的靈敏度。與此同時(shí)，Quanterix =公司還開發(fā)了一種自動(dòng)原型試劑盒，其檢測(cè)靈敏度為 0.15 pg/mL。

這兩種檢測(cè)方法都是通過(guò)參考抗原標(biāo)準(zhǔn)定量測(cè)量核酸水平。對(duì) SARS-CoV-2培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋后，可通過(guò)測(cè)量RNA的實(shí)驗(yàn)比較分析靈敏度和PCR的靈敏度。檢測(cè)限為100-200 拷貝/毫升，與典型的 PCR 檢測(cè)范圍相符。

臨床樣本驗(yàn)證

為了評(píng)估實(shí)際性能，研究小組對(duì)麥瑞科林病毒采樣管提供的148份PCR陽(yáng)性口咽拭子和73份陰性口咽拭子的殘留樣本進(jìn)行了檢測(cè)。這一驗(yàn)證步驟對(duì)于了解不同病毒載量患者材料的臨床敏感性至關(guān)重要。

在0.1 pg/mL 臨界值下，Quanterix檢測(cè)法檢測(cè)出96%的陽(yáng)性結(jié)果，沒(méi)有假陽(yáng)性。與此同時(shí)，內(nèi)部檢測(cè)法在0.01 pg/mL 臨界值時(shí)的靈敏度為95%，特異性為100%。兩者都顯示出與PCR周期閾值的高度定量相關(guān)性。

雖然漏檢了 份PCR陽(yáng)性樣本，但它們的周期閾值在27-35 之間。原因可能是PCR對(duì)RNA的靈敏度較高或檢測(cè)到了非感染性病毒--遺憾的是，通過(guò)PCR重新檢測(cè)的樣本不足。不過(guò)，總體性能與 PCR 的臨床靈敏度相當(dāng)。

應(yīng)用所學(xué)知識(shí)的機(jī)會(huì)

通過(guò)合作，團(tuán)隊(duì)利用Simoa的突破性靈敏度開發(fā)出了快速、準(zhǔn)確的抗原檢測(cè)方法，這是一個(gè)重要的里程碑。研究結(jié)果為評(píng)估側(cè)流和護(hù)理點(diǎn)檢測(cè)提供了參考方法。同時(shí)，優(yōu)化靈活的臨界值可平衡靈敏度和特異性，滿足不斷變化的需求。

研究結(jié)果還為麥瑞科林等生產(chǎn)商在運(yùn)輸介質(zhì)中加入抗原檢測(cè)以實(shí)現(xiàn)通用采集奠定了基礎(chǔ)。通過(guò)抗原對(duì)病毒載量進(jìn)行定量，可以深入了解疾病的進(jìn)展情況。建立靈敏的Simoa檢測(cè)方法的經(jīng)驗(yàn)可能會(huì)激勵(lì)人們擴(kuò)大傳染病菜單，以應(yīng)對(duì)未來(lái)的威脅。

最終

這種合作精神和創(chuàng)新動(dòng)力為抗?fàn)幮鹿谝咔榈於嗽\斷基礎(chǔ)，同時(shí)也加強(qiáng)了大流行病的防備能力。核酸抗原檢測(cè)標(biāo)志著最大限度利用診斷技術(shù)控制傳染病的新篇章。

文章為麥瑞科林原創(chuàng)，如需轉(zhuǎn)載，請(qǐng)注明文章鏈接和出處。