qPCR耗材選擇完全指南

定量PCR（qPCR）已成為病毒核酸檢測(cè)的主要技術(shù)。除了高質(zhì)量的檢測(cè)試劑和穩(wěn)定的qPCR儀器外，檢測(cè)耗材的質(zhì)量也對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度有很大影響。那么，如何選擇合適的qPCR耗材呢？

1. 高純度

?高質(zhì)量、高純度、高透明度的聚丙烯（PP）。

在潔凈室環(huán)境中生產(chǎn)和加工。

為什么 PCR 耗材通常由 PP 材料制成，為什么需要潔凈環(huán)境？

PCR/qPCR 耗材經(jīng)常直接接觸試劑或樣品。聚丙烯 (PP) 具有生物惰性，表面不易附著生物分子。它還具有出色的耐化學(xué)性和耐溫性，可在 121°C 的溫度下進(jìn)行蒸汽滅菌，并能承受熱循環(huán)過(guò)程中的溫度波動(dòng)。

由于PCR耗材必須不含污染物和抑制劑，因此耗材的質(zhì)量和清潔度至關(guān)重要。雖然高壓和輻射可以消除細(xì)菌和 DN 酶，但卻無(wú)法清除灰塵或 DNA 殘留物，因?yàn)樗鼈兛赡軙?huì)抑制 PCR 反應(yīng)或?qū)е路翘禺愋詳U(kuò)增。即使是微小的污染物也會(huì)吸收熒光，并因其光密度而影響信號(hào)收集。因此，塑料耗材生產(chǎn)的各個(gè)階段，從成型到最終包裝，都必須使用有嚴(yán)格顆粒限制的設(shè)備。

2. 高導(dǎo)熱性

極薄的壁可優(yōu)化熱傳導(dǎo)并縮短生產(chǎn)周期。

壁厚更厚的耗材是否更穩(wěn)定？

不是，壁厚直接影響導(dǎo)熱性。極薄的壁可優(yōu)化熱傳導(dǎo)，縮短循環(huán)時(shí)間。為提高 PCR 效率，確保反應(yīng)穩(wěn)定、高效，均勻的超薄 PCR 耗材是理想之選。

3. 高熒光信號(hào)反射

對(duì)于qPCR，建議使用高質(zhì)量的白色PCR耗材。

管帽： 透光率的高低直接影響到信號(hào)的收集，因此具有出色光學(xué)透明度的管帽對(duì)于熒光檢測(cè)至關(guān)重要。

如何選擇透明、有色和白色PCR管/板？

對(duì)于傳統(tǒng)PCR，可使用透明或有色PCR 管。彩色透明管便于樣品分類和跟蹤。但對(duì)于 qPCR，建議使用白色耗材，因?yàn)槎恳蕾囉陟`敏、準(zhǔn)確的熒光信號(hào)傳輸。研究表明，白色 PCR 產(chǎn)品比傳統(tǒng)的透明管能更好地反映信號(hào)，減少孔與孔之間的串?dāng)_，優(yōu)化 qPCR 結(jié)果。

4. 高抗污染性

?管帽應(yīng)密封嚴(yán)實(shí)，具有良好的試管適應(yīng)性，以減少交叉污染。

? PCR 板應(yīng)具有凸起的孔，以提高密封性。

?在一側(cè)提供操作把手。蓋條上突出的統(tǒng)一抓握區(qū)可防止打開過(guò)程中的污染。

平孔 PCR 版好還是凸孔 PCR 版好？

最佳選擇取決于應(yīng)用。常見(jiàn)的 PCR 板有平孔和凸孔兩種。

平孔板與大多數(shù) PCR/qPCR 儀器兼容，但與自動(dòng)化系統(tǒng)不兼容。除非與板架一起使用，否則移液過(guò)程中的穩(wěn)定性較低。

凸起孔板可提高薄膜密封性，降低交叉污染風(fēng)險(xiǎn)，適合自動(dòng)化操作。

5. 高識(shí)別度

每個(gè)孔都有字母數(shù)字標(biāo)簽，便于識(shí)別。

切角指示方向。

為什么 96/384 孔板有不同的切角和標(biāo)簽？

切角和標(biāo)簽的目的不同。

切角取決于儀器對(duì)定向的要求。

彩色數(shù)字代碼或蝕刻標(biāo)記等標(biāo)簽有助于識(shí)別各個(gè)孔和樣品。蝕刻印版可為某些自動(dòng)化應(yīng)用提供更好的密封性。

6. 精確體積

通過(guò)密封蓋或密封膜提高密封性，減少蒸發(fā)。

如何選擇合適的試管/平板尺寸？

請(qǐng)遵循以下指南：

?根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求匹配產(chǎn)品

優(yōu)先選擇體積較小的消耗品，它們能改善熱傳遞、減少蒸發(fā)并防止過(guò)度填充。樣品不足可能會(huì)蒸發(fā)，而過(guò)量則會(huì)降低導(dǎo)熱性，造成溢出和污染。

常見(jiàn)反應(yīng)容器尺寸：

?單管/8 管條/12 管條： 0.5毫升、0.2毫升、0.15毫升、0.1毫升

?96 孔板： 0.2mL、0.15mL、0.1mL 384 孔板： 0.04mL

7. 易于使用

耗材應(yīng)在不影響密封性的前提下易于操作，同時(shí)與儀器參數(shù)相匹配。

有裙邊與無(wú)裙邊 PCR 板？

裙邊能在機(jī)器人處理和移液過(guò)程中穩(wěn)定印板，同時(shí)提供機(jī)械強(qiáng)度，因此更適合自動(dòng)化應(yīng)用。PCR 印板有無(wú)裙邊、半裙邊和全裙邊三種類型。

? 無(wú)裙 - 與大多數(shù)熱循環(huán)儀兼容，但不支持自動(dòng)化。需要板架以保證移液穩(wěn)定性。

?半裙式 - 適用于條形碼標(biāo)記和某些自動(dòng)化。提高了移液穩(wěn)定性。

?全裙式 - 適用于機(jī)械性能更好的自動(dòng)化，適合帶有突出加熱蓋的循環(huán)器。移液非常穩(wěn)定。

哪種 PCR 密封膜是最佳選擇？

使用優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品使密封膜與實(shí)驗(yàn)相匹配，既能保護(hù)樣品不受污染，又能獲得可靠的結(jié)果。選擇耐高溫、密封性好、光學(xué)清晰度高且易于操作的薄膜。

如何選擇移液器吸頭？

劣質(zhì)、不合適的吸頭會(huì)影響移液器的準(zhǔn)確性和精確度。吸頭和移液器作為一個(gè)系統(tǒng)發(fā)揮作用，對(duì)正確的液體轉(zhuǎn)移有相匹配的要求。請(qǐng)遵循技術(shù)指南并使用推薦的吸頭，以確保精度。

吸頭有散裝袋裝、盒裝、低留液量、過(guò)濾型和自動(dòng)型。

透明吸頭與彩色吸頭

大多數(shù)吸頭由化學(xué)惰性透明聚丙烯塑料制成，適用于較寬的溫度范圍。但材料質(zhì)量差別很大--高質(zhì)量的吸頭通常使用原生聚丙烯，而便宜的吸頭通常使用回收塑料。

此外，還經(jīng)常添加少量添加劑：

用于體積識(shí)別的著色劑，如藍(lán)色（1000μL）、黃色（200μL）。最好是高品質(zhì)色母粒，而不是廉價(jià)的工業(yè)顏料。

?脫模劑，用于使吸頭從模具中脫落。更多的添加劑會(huì)增加移液過(guò)程中的不良反應(yīng)。

過(guò)濾吸頭可防止樣品和氣溶膠污染，同時(shí)不影響性能。建議用于基因組應(yīng)用和 PCR，以避免 DNA/RNA 污染或處理?yè)]發(fā)性溶液。

低滯留吸頭可優(yōu)化液體釋放，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的吸頭-液體相互作用，在不同性質(zhì)的液體中提高精確度。

加長(zhǎng)吸頭可從試管等高而窄的容器中移液。

袋包裝與盒包裝

盒裝在大多數(shù)成熟市場(chǎng)都很流行。袋裝成本較低，但污染風(fēng)險(xiǎn)較大。

最近出現(xiàn)了節(jié)省空間的新型筆芯包裝（8-10 個(gè)疊放的吸頭柱），可減少塑料的使用和對(duì)環(huán)境的影響。雖然這種包裝形式在國(guó)內(nèi)還不常見(jiàn)，但很可能代表著未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)。

麥瑞科林以嚴(yán)格的質(zhì)量控制為后盾，生產(chǎn)一流的 PCR采樣耗材。我們的潔凈室設(shè)施和原生聚丙烯可防止污染，超薄壁優(yōu)化了板和管的導(dǎo)熱性和光學(xué)清晰度。我們?cè)O(shè)計(jì)的采樣耗材適用于主要的 PCR 儀器品牌，以保證兼容性。通過(guò)對(duì)最新制造技術(shù)的投資以及對(duì)純度、精度和性能的優(yōu)先考慮，麥瑞科林提供最優(yōu)質(zhì)的 PCR 耗材，幫助實(shí)驗(yàn)室輕松獲得可靠的結(jié)果。選擇麥瑞科林，您就擁有了一個(gè)致力于 PCR 成功的耗材合作伙伴。

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