PCR or 膠體金？甲乙流感拭子檢測一致性大比拼

本期文章引用格式：朱旻，曹國君，許育，等.甲、乙型流感病毒兩種方法檢測結(jié)果的一致性分析[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2023,44(4):425-429.

流行性感冒（簡稱流感）是由特定的病毒引起的。它主要通過人們咳嗽、打噴嚏時產(chǎn)生的飛沫傳播，尤其是老年人和兒童更容易被感染。流感的特點是潛伏期短，發(fā)病快，并且常在特定季節(jié)暴發(fā)。流感病人常常會覺得冷、頭痛等，兒童如果病情嚴重還可能出現(xiàn)休克等危險情況。由于流感病毒經(jīng)常變異，給流感的準確診斷和預(yù)防控制帶來了很大的困難。

膠體金免疫層析（簡稱膠體金法）是檢測流感的一種常用方法，它操作簡單，出結(jié)果快，但在準確性和特異性方面不太理想，有時會導(dǎo)致漏診或誤診。隨著科技的發(fā)展，我們有了更先進的病毒檢測方法，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)和測序技術(shù)等。

本研究計劃同時使用膠體金法和實時熒光定量PCR（qPCR）法來檢測疑似流感患者的樣本，比較這兩種方法在檢測甲、乙型流感病毒時的一致性。同時，我們還將評估一些感染相關(guān)指標，如c反應(yīng)蛋白（CRP）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）和白細胞計數(shù)等，在甲、乙型流感診斷中的價值。

PART.01研究內(nèi)容概述

本研究旨在分析流感疑似患者的流感咽拭子標本，并對病毒類型進行確認，以及相關(guān)生物標志物的檢測。因此，共納入了300例有流感樣癥狀的疑似患者。

實驗方法

（1）樣本收集

從300例疑似流感患者處收集口咽拭子標本。

（2）病毒檢測

核酸檢測：使用甲型/乙型流感病毒核酸檢測試劑盒進行核酸提取和實時熒光定量PCR（qPCR）法檢測。所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行，確保在3小時內(nèi)完成檢測。

抗原檢測：采用流感病毒抗原檢測試劑盒進行膠體金法檢測。此方法在20分鐘內(nèi)完成。

驗證方法：采用測序法對上述兩種方法的檢測結(jié)果進行驗證，測序法被視為結(jié)果判斷的“金標準”。

（2）分組

根據(jù)測序結(jié)果，將受試者分為3組：甲型流感病毒陽性組、乙型流感病毒陽性組和陰性組（甲、乙型流感病毒檢測均為陰性）。

（3）生物標志物檢測

檢測并比較三組人群的外周血C反應(yīng)蛋白（CRP）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）水平，以及白細胞計數(shù)、中性粒細胞絕對值、淋巴細胞絕對值和單核細胞絕對值。

PART.02研究目的與意義

通過本研究，我們期望能夠：

評估qPCR法和膠體金法在流感病毒檢測中的效能。

了解不同類型流感病毒感染對人體生物標志物的影響。

為流感的早期診斷、病情監(jiān)測和治療策略提供有價值的參考信息。

PART.03主要研究結(jié)果

qPCR法與測序法的一致性較高，對于甲型和乙型流感病毒的檢測靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值均接近或達到100%，顯示該方法準確可靠。

膠體金法與測序法相比，一致性較低，尤其是對于乙型流感病毒的檢測，靈敏度僅為34.43%。

qPCR法與膠體金法在檢測甲型和乙型流感病毒時的一致性也較差，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

在感染相關(guān)指標的組間比較中，白細胞計數(shù)、中性粒細胞絕對值、淋巴細胞絕對值和單核細胞絕對值在陰性組與甲型和乙型流感病毒陽性組之間存在顯著差異，但兩種病毒陽性組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

PART.04總結(jié)

流感是一種傳播迅速、感染力強的疾病，會給社會、家庭和個人帶來很大的負擔(dān)，甚至威脅到生命。因此，需要盡早、快速并準確地診斷流感，以便于更好地控制病情，減少死亡，避免不必要的藥物使用，節(jié)約醫(yī)療資源。同時，及時隔離流感患者，切斷傳播途徑，也是防止疫情擴散的關(guān)鍵。

實驗室里有很多方法可以檢測流感。常見的血常規(guī)可以通過看不同細胞的數(shù)量和形態(tài)變化，來初步判斷病情。CRP和SAA是兩種身體在感染或受傷時產(chǎn)生的反應(yīng)蛋白，其水平升高可以提示身體有炎癥。其中，CRP在細菌、病毒等感染時都會升高，而SAA在病毒感染時升高得更快、更高。因此，結(jié)合血常規(guī)、CRP和SAA等多個指標一起檢測，可以提高流感的診斷準確性。

然而，本研究發(fā)現(xiàn)，在某些情況下，僅僅依靠CRP和SAA并不能完全區(qū)分不同類型的流感和其他呼吸道感染。因此，還需要更特異的方法來檢測流感病毒，比如病毒分離培養(yǎng)、膠體金法、qPCR法、測序法等。其中，膠體金法和qPCR法在臨床實驗室中應(yīng)用較為廣泛，而測序法雖然準確，但因為成本高、耗時長，所以不太適用于臨床實驗室的常規(guī)檢測。

本研究還發(fā)現(xiàn)，膠體金法在檢測流感時靈敏度較低，可能的原因有：一是流感病毒核酸序列變異可能導(dǎo)致抗原檢測出現(xiàn)假陰性結(jié)果；二是抗原檢測受病毒抗原表達水平的影響，而核酸檢測則更靈敏。盡管如此，膠體金法仍具有操作簡便、成本低、速度快等優(yōu)點，對于部分病毒載量高的患者可以實現(xiàn)快速診斷，對疫情防控具有重要意義。

綜上所述，我們需要綜合運用多種檢測方法，提高流感的診斷準確性，為臨床治療和疫情防控提供有力支持。

參考文獻：略。

-通信作者簡介 -

曹國君

臨床檢驗診斷學(xué)博士，副主任技師。上海市抗癌協(xié)會腫瘤標志物專業(yè)委員會（腫瘤免疫學(xué)組）委員，《重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》青年編委，《Advances in Clinical Chemistry》和《CLINICA CHIMICA ACTA》審稿人。近年來發(fā)表SCI和核心期刊40余篇，負責(zé)在研/完成各級課題11項，獲得國家發(fā)明專利授權(quán)6項，實用新型專利授權(quán)2項，入選上海市“醫(yī)苑新星”青年醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)計劃，榮獲上海市優(yōu)秀發(fā)明選拔賽金獎2次、銀獎1次，榮獲第二屆上海市優(yōu)秀青年檢驗技師成果一等獎、上海市醫(yī)學(xué)會優(yōu)秀青年科研成績獎和中國抗癌協(xié)會第三屆“構(gòu)建醫(yī)患命運共同體 共享美好醫(yī)患關(guān)系”科普系列作品二等獎等榮譽。

編輯：管佩鈺  審校：方琪