唾液檢測(cè)，呼吸道疾病快速檢測(cè)的新樣本突破口

唾液作為一種分子診斷檢測(cè)樣本類型，對(duì)于SARS-CoV-2以外的傳染病，如猴痘和流感，展現(xiàn)出了巨大潛力。

這一研究結(jié)果在本周舉行的歐洲臨床微生物學(xué)和傳染病學(xué)會(huì)全球大會(huì)（ESCMID Global）上提出。

此外，在一次專家見(jiàn)面會(huì)上，研究人員主張加強(qiáng)對(duì)唾液在傳染病診斷中的探索和使用，他們指出，與更成熟的方法相比，唾液作為大規(guī)模篩查和世界資源有限地區(qū)的樣本類型的潛力，要大于其被感知的缺點(diǎn)——例如較低的靈敏度和樣本處理及運(yùn)輸問(wèn)題。

在ESCMID Global的海報(bào)展示中，由耶魯大學(xué)全球健康研究所的流行病學(xué)研究科學(xué)家兼教員Anne Wyllie領(lǐng)導(dǎo)的研究人員，展示了對(duì)30個(gè)來(lái)自猴痘陽(yáng)性個(gè)體的唾液樣本進(jìn)行測(cè)試的結(jié)果——該研究去年也發(fā)表【1】在MedRxiv上。

Wyllie因之前對(duì)SalivaDirect COVID-19測(cè)試的開(kāi)發(fā)做出貢獻(xiàn)而聞名，這是最早獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）緊急使用授權(quán)（EUA）的基于唾液的COVID-19測(cè)定之一。

在他們的研究中，Wyllie和同事們從Flow Health收集了Spectrum SDNA-100收集裝置中的樣本，并用五種不同的PCR測(cè)定進(jìn)行了測(cè)試。

他們還檢查了在各種模擬運(yùn)輸和儲(chǔ)存條件下樣本的穩(wěn)定性。

正如他們?cè)诤?bào)中解釋的，猴痘的當(dāng)前臨床診斷使用病變拭子，但許多患者在病變發(fā)作前就出現(xiàn)了癥狀。

作為美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心認(rèn)可的傳播源，唾液可能有助于早期感染檢測(cè)，以便快速進(jìn)行接觸后疫苗接種和隔離。

他們發(fā)現(xiàn)，由美國(guó)公司Co-Diagnostics開(kāi)發(fā)的Logix Smart Mpox (2-Gene) RUO測(cè)定法，針對(duì)病毒F8L基因，整體檢測(cè)性能更好，在所有測(cè)定類型中平均循環(huán)閾值（Ct）值一致。

此外，唾液中猴痘病毒的檢測(cè)在三種不同的無(wú)提取工作流程中具有可比性，并且在多種條件下，DNA在原始唾液中相對(duì)穩(wěn)定，可持續(xù)24至48小時(shí)，而在72小時(shí)時(shí)顯著降解。

他們得出結(jié)論，他們的研究結(jié)果支持使用唾液樣本可靠地診斷猴痘樣本，降低測(cè)試成本，并在中低收入國(guó)家實(shí)現(xiàn)更簡(jiǎn)單、更便宜的自我收集和測(cè)試。

同時(shí)，內(nèi)布拉斯加大學(xué)醫(yī)學(xué)中心（UNMC）的研究人員展示了一項(xiàng)研究的結(jié)果，該研究檢查了自收集唾液樣本和無(wú)提取PCR在流感監(jiān)測(cè)中的效用，這是基于之前發(fā)表在2021年JAMA Network Open上的一些相同研究人員的研究【2】，后者評(píng)估了一個(gè)公立學(xué)校區(qū)的SARS-CoV-2篩查和環(huán)境監(jiān)測(cè)。

他們從急診科評(píng)估呼吸道疾病的73名患者中收集唾液，作為被動(dòng)滴漏，比較使用鼻咽（NP）拭子進(jìn)行商業(yè)多重分子板測(cè)試的臨床呼吸病原體測(cè)試的流感檢測(cè)。

他們還對(duì)2022年11月至2023年3月針對(duì)無(wú)癥狀個(gè)體的社區(qū)基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中剩余的自收集唾液樣本進(jìn)行了無(wú)提取測(cè)試。

UNMC研究人員發(fā)現(xiàn)，使用提取自由RT-qPCR在滴漏樣本中隨時(shí)間檢測(cè)流感，與NP參考測(cè)試的一致性達(dá)到100%，其中有5名陽(yáng)性和68名陰性患者。

此外，研究人員發(fā)現(xiàn)，社區(qū)基礎(chǔ)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目的月陽(yáng)性率從零到近3%不等。

改變觀念

在COVID-19大流行期間，唾液作為一種傳染病分子診斷（MDx）測(cè)試的樣本類型取得了進(jìn)展，但尚未提升為與鼻咽拭子PCR測(cè)試的黃金標(biāo)準(zhǔn)相提并論。

在專家見(jiàn)面會(huì)上，Wyllie與利物浦熱帶醫(yī)學(xué)院的博士后研究員Rachel Louise Byrne一起，她也曾廣泛研究唾液作為SARS-CoV-2檢測(cè)的NP拭子的替代樣本類型。

Wyllie和Byrne指出了來(lái)自不同利益相關(guān)者的唾液樣本的常見(jiàn)感知問(wèn)題。

臨床醫(yī)生經(jīng)常引用性能較差、臨床價(jià)值有限、保險(xiǎn)報(bào)銷問(wèn)題以及改變醫(yī)生常規(guī)的困難。

與此同時(shí)，臨床實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常抱怨運(yùn)輸問(wèn)題、難以處理的樣本、低靈敏度和特異性以及有限的市場(chǎng)價(jià)值。

盡管如此，自2021年以來(lái)，基于唾液的診斷市場(chǎng)在傳染病應(yīng)用方面的增長(zhǎng)速度，比內(nèi)分泌學(xué)、心臟病學(xué)、自身免疫測(cè)試和腫瘤學(xué)等其他幾個(gè)醫(yī)學(xué)測(cè)試類別要快，預(yù)計(jì)到2026年將保持近8%的復(fù)合年增長(zhǎng)率，Wyllie指出，引用了研究咨詢公司PreScouter的微生物學(xué)技術(shù)總監(jiān)Maikel Boot提供的數(shù)據(jù)。

“進(jìn)入唾液領(lǐng)域的時(shí)機(jī)已經(jīng)成熟，”Wyllie說(shuō)。

此外，Wyllie和Byrne認(rèn)為，唾液檢測(cè)的潛在優(yōu)勢(shì)值得打破圍繞它的一些先入之見(jiàn)。

它非常適合大規(guī)模和重復(fù)測(cè)試，而且不需要醫(yī)療保健工作者進(jìn)行收集，從而降低了傳播風(fēng)險(xiǎn)。

此外，盡管NP拭子相對(duì)無(wú)創(chuàng)，但很明顯，向管子里滴口水是一種更舒適的收集程序。

此外，越來(lái)越多的研究挑戰(zhàn)了圍繞唾液檢測(cè)的許多負(fù)面看法。

Wyllie是2020年4月在MedRxiv上發(fā)表的一篇開(kāi)創(chuàng)性論文【3】的通訊作者，該論文證明了唾液對(duì)SARS-CoV-2檢測(cè)比NP拭子更敏感，該工作后來(lái)在當(dāng)年晚些時(shí)候發(fā)表在《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》的通信【4】中進(jìn)行了總結(jié)。

與此同時(shí)，Byrne是2023年1月在PLOS One上發(fā)表的一篇論文【5】的共同通訊作者，該論文展示了如何成功利用唾液采樣進(jìn)行醫(yī)療保健工作者的常規(guī)篩查。

她還是一位研究信函【6】的第一作者，該信函于2020年11月發(fā)表在《新發(fā)傳染病》上，顯示了110名患者唾液樣本中SARS-CoV-2病毒載量與鼻咽拭子樣本中發(fā)現(xiàn)的病毒載量相似。

還有許多其他同行評(píng)審出版物展示了唾液在SARS-CoV-2和其他呼吸道病毒（包括呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、人偏肺病毒、人鼻病毒、流感和腺病毒）MDx測(cè)試中的潛力。

歐盟監(jiān)管機(jī)構(gòu)已經(jīng)跟進(jìn)了這些文獻(xiàn)，為羅氏、Becton Dickinson/CerTest Biotec和Canary Molecular等公司的基于唾液的COVID-19診斷測(cè)試應(yīng)用了CE-IVD標(biāo)記。

然而，F(xiàn)DA仍然有些不信服，已經(jīng)向幾種基于唾液的診斷授予了EUA，但迄今為止尚未對(duì)任何基于唾液的測(cè)試授予完全許可——盡管目前尚不清楚提交了多少申請(qǐng)。

Wyllie和Byrne在ESCMID上指出，在醫(yī)療保健社區(qū)已經(jīng)習(xí)慣于使用NP拭子的情況下，進(jìn)行基于唾液的分子測(cè)試存在困難。

例如，Wyllie指出，使用唾液的測(cè)試必須專門為唾液設(shè)計(jì)——換句話說(shuō)，使用與NP拭子相同的協(xié)議可能會(huì)損害基于唾液的測(cè)試性能。

此外，一致地收集質(zhì)量良好的唾液樣本可能更加困難，這對(duì)于測(cè)試性能至關(guān)重要。

如果使用正確的技術(shù)，NP拭子通常是一致的，但唾液樣本可能會(huì)因患者提供樣本的指示方式而大不相同——更喜歡被動(dòng)滴漏而不是“吐痰”。

“良好的唾液樣本對(duì)良好的測(cè)試至關(guān)重要。”，Byrne說(shuō)，“樣本應(yīng)該是清澈到白色的顏色。有時(shí)它會(huì)含有痰，例如，當(dāng)沒(méi)有給出清晰的指示時(shí)，可能會(huì)發(fā)生這種情況。對(duì)于住院患者來(lái)說(shuō)，收集樣本可能很困難，因?yàn)樗麄兛赡苁歉稍锖兔撍?。但?duì)于門診患者來(lái)說(shuō)，它可以是一個(gè)非常有前景的樣本類型?！?/p>

這是Wyllie和同事們?cè)?020年與耶魯大學(xué)SalivaDirect團(tuán)隊(duì)合作評(píng)估該測(cè)試作為COVID-19監(jiān)測(cè)工具的使用時(shí)，從NBA收集樣本時(shí)艱難學(xué)到的。

“NBA樣本是彩虹的每一種顏色?！?，她說(shuō)。

令人驚訝的是，他們發(fā)現(xiàn)最近攝入的食物和飲料對(duì)結(jié)果影響不大。

粘液和白細(xì)胞——即粘液——以及奇怪地，高濃度的高露潔牙膏是唯一始終混淆結(jié)果的東西。

唾液檢測(cè)可能已經(jīng)得到了公眾輿論的支持。

消費(fèi)者已經(jīng)習(xí)慣了所謂的“唾液套件”，這是多年來(lái)由23andMe等消費(fèi)者基因組學(xué)公司提供的，而在12月，SalivaDirect團(tuán)隊(duì)在MedRxiv上發(fā)表了一項(xiàng)調(diào)查結(jié)果【7】，表明如果他們能夠確保所有樣本類型對(duì)SARS-CoV-2測(cè)試的性能相等，消費(fèi)者壓倒性地更愿意選擇唾液作為樣本類型。

Wyllie承認(rèn)：“但我們知道并非每個(gè)人都會(huì)接受它——向管子里滴口水不太有尊嚴(yán)，而且有些藥物會(huì)導(dǎo)致口干，特別是在老年人口中。”

“我們需要考慮它可以促進(jìn)快速和容易測(cè)試的情景。至少我們需要將其驗(yàn)證為另一種工具，當(dāng)NP拭子有問(wèn)題時(shí)，或者，例如，當(dāng)患者不想這樣做時(shí)，就像一些父母對(duì)他們的孩子進(jìn)行RSV測(cè)試時(shí)看到的那樣?！?/p>

鑒于其在資源有限的環(huán)境中作為樣本類型的潛力，“我禁不住想到結(jié)核病，”Byrne說(shuō)，他引用了2023年9月在《柳葉刀微生物》上發(fā)表的一篇綜述【8】，該綜述討論了多種替代樣本類型（包括唾液）與痰液進(jìn)行培養(yǎng)和核酸擴(kuò)增測(cè)試的準(zhǔn)確性。

盡管關(guān)于唾液樣本的數(shù)據(jù)有限，但口腔拭子已被證明是作為替代樣本類型的有前景的選擇，而且“如果你正在進(jìn)行口腔拭子，你基本上是在收集唾液，希望在未來(lái)幾年我們會(huì)看到更多的數(shù)據(jù)?！?/p>

參考文獻(xiàn)

[1]    https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2023.06.12.23291295v1

[2]    https://jamanetwork.com/journals/jamanetworkopen/fullarticle/2784428

[3]    https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.04.16.20067835v1

[4]    https://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJMc2016359

[5]    https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0280908

[6]    https://wwwnc.cdc.gov/eid/article/26/11/20-3283_article

[7]    https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2023.12.13.23299858v1

[8]    https://www.thelancet.com/journals/lanmic/article/PIIS2666-5247(23)00190-8/fulltext